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THP-1細胞培養(yǎng)建議

一、細胞概述

THP-1細胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細胞白血病細胞系。它來自一位急性單核細胞白血病患者的血液，有分化為多種巨噬細胞的能力，是各領(lǐng)域研究常用的細胞系之一。

THP-1  細胞的特點

  喜歡酸性環(huán)境

在偏酸性環(huán)境中，THP-1生長更快，所以當培養(yǎng)基稍微變黃（呈橘紅色）時，是適合細胞生長的，此時補液或半換液即可。

 有密度依賴性

THP-1細胞密度低時，生長較慢，培養(yǎng)密度維持在50萬-100萬細胞/毫升為宜；超過200萬/毫升則需要傳代。

二、細胞培養(yǎng)條件

三、細胞培養(yǎng)建議

1、細胞復蘇：將凍存管從液氮中取出后迅速放入37℃水浴鍋中搖晃解凍，準備15ml離心管，將完全培養(yǎng)基移取6ml與細胞混合均勻，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，再加入6ml完全培養(yǎng)基吹勻后重復離心3min，棄去上清液，補加6ml完全培養(yǎng)基吹勻。然后將細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶放入細胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2）過夜，第二天檢查細胞密度。

2、細胞傳代：當細胞密度達到約8x10^5cells/ml左右時，即可進行傳代。由于是懸浮細胞，可直接將細胞吸出，離心之后傳代。傳代最少濃度不應少于1x10^5 cells/ml。如果用肉眼觀察則將培養(yǎng)瓶平放靜置后觀察鏡下細胞密度達到80%，即可進行傳代。

3、細胞凍存：50%RPMI-1640+40%FBS+10%DMSO 配置細胞凍存液或使用Biochannel細胞凍存液（，將培養(yǎng)瓶中細胞懸液抽出，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液。按照需求將配置好的細胞凍存液加入離心管中吹勻細胞，再分裝凍存管中置于程序降溫盒中在-80℃冰箱中過夜，次日放入液氮中保存。

四、BioChannel 血清培養(yǎng)效果

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五、THP-1培養(yǎng)常見問題及解決方案

Q: 培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦？

A: 少量細胞貼壁屬于正常情況，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當貼壁細胞的比例高于20%，說明細胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。

Q: 培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦？

A: 少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正常現(xiàn)象，特別是細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。

Q: 培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

A: β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時，可適當增加巰基乙醇的比例（不超過標準量的1.5倍）。

Q: 鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦？

A: 懸浮細胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細胞沉底，之后再輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細胞密度。