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細(xì)胞污染是我們在培養(yǎng)時最不愿意遇到卻又或多或少無法避免的問題，今天我們就來聊一聊細(xì)胞的污染類型。

細(xì)胞污染其實是一個廣義的說法，我們認(rèn)為只要是混入細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境中會對細(xì)胞生存有害的成分以及造成我們細(xì)胞培養(yǎng)不純的異物都應(yīng)該被視作污染。

細(xì)胞污染一般不能夠被完全消除，但我們能夠通過我們的操作等處理減少細(xì)胞污染發(fā)生的頻率和降低細(xì)胞污染后果的嚴(yán)重性。

細(xì)胞污染源按類型來分一般可以分為化學(xué)性污染、物理性污染以及生物性污染。

化學(xué)性污染

化學(xué)性污染的來源一般為對細(xì)胞有毒性或?qū)?xì)胞產(chǎn)生刺激的化學(xué)物質(zhì)。例如：未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、輔助生長因子以及各類存儲容器等。

此類化學(xué)性污染會導(dǎo)致細(xì)胞生長受到抑制，甚至?xí)?dǎo)致細(xì)胞死亡。

預(yù)防方法

無論是蒸餾水、雙蒸水還是超純水等，隨著時間的放置都會導(dǎo)致純凈度下降，我們需要盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，如果使用存放過久的溶液，需要根據(jù)性質(zhì)通過過濾或高溫滅菌的方式除去其中的雜質(zhì)。

同細(xì)胞系最佳培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求也會不一致，在適配培養(yǎng)體系時需要根據(jù)自身不同情況選擇最適宜自身細(xì)胞培養(yǎng)的條件來選擇培養(yǎng)體系。

血清屬于天然物質(zhì)，其中的成分十分復(fù)雜，不同品牌的血清也因為生產(chǎn)工藝以及質(zhì)量也會各不相同，為了保證實驗的可重復(fù)性，選用同一品牌同一批次血清是最適宜的。

物理性污染

物理性污染主要是通過影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分，從而影響細(xì)胞的代謝。例如：培養(yǎng)環(huán)境中的物溫度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)等。

此類污染由于細(xì)胞、培養(yǎng)液或其他培養(yǎng)試劑暴露在放射線、輻射或過冷過熱的溫度中，可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變，如細(xì)胞同步化、細(xì)胞生長受抑制，甚至細(xì)胞死亡。

預(yù)防方法

渦旋振動儀、離心機和搖床等會引發(fā)機械振動的儀器，建議不要放在二氧化碳培養(yǎng)箱附近；

細(xì)胞培養(yǎng)試劑按儲存要求放置在固定位置，避免周圍有同位素或者其他放射性物質(zhì)的存在。

培養(yǎng)箱使用過程中盡量避免頻繁開關(guān)門，以免造成二氧化碳濃度和溫度的長時間或大幅度波動。

處理細(xì)胞時，不宜長時間讓細(xì)胞處于室溫狀態(tài)，會影響其生長。

生物性污染

生物性污染主要為各類微生物導(dǎo)致的細(xì)胞污染，不同的微生物污染對于細(xì)胞的生長也會導(dǎo)致不同的影響，微生物污染主要可以分為四個種類，為細(xì)菌污染、真菌污染、病毒污染以及支原體污染。

病毒污染和支原體污染對于細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)部的影響是緩慢并且長期的；相較來說，細(xì)菌污染和真菌污染就會在培養(yǎng)容器中迅速增殖，會在極短時間內(nèi)就抑制細(xì)胞生長，并且產(chǎn)生各類有毒有害物質(zhì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

例一：常見細(xì)胞293T在受到大腸桿菌污染

細(xì)胞受到污染后，外觀可見培養(yǎng)液變渾濁，培養(yǎng)液上層會有漂浮污染物，pH值改變，短時間就會由紅變黃。貼壁細(xì)胞會從貼壁狀態(tài)脫落死亡，生長停滯。

例二：真菌污染

上圖為常見真菌污染，真菌大多數(shù)為絲狀分支結(jié)構(gòu)，一般有念珠菌、酵母菌、霉菌等。受到真菌污染后第一時間培養(yǎng)基不會產(chǎn)生過多變化，在真菌繁殖到一定數(shù)量后，可肉眼可見培養(yǎng)基表面產(chǎn)生或大或小的菌落，在顯微鏡下觀察可見絮狀菌絲。

預(yù)防方法

預(yù)防細(xì)菌污染一般用雙抗生素；

污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液，此法在污染早期有效。

預(yù)防真菌污染一般是培養(yǎng)體系中加入三抗；

污染后建議丟棄細(xì)胞，徹底消毒滅菌細(xì)胞房和CO2培養(yǎng)箱，扔掉可能被污染的培養(yǎng)基，對用過的實驗器材進行滅菌。

TIPS:在任何情況下，完全去除細(xì)胞中的微生物污染是及其困難的!過度使用抗生素可能產(chǎn)生更強抗性的菌株，撤藥后極易復(fù)發(fā)。對于易重新獲得的細(xì)胞株，建議直接處理培養(yǎng)物，防止污染擴散！同時重新以新批次細(xì)胞進行實驗，節(jié)約時間，減少風(fēng)險。