內(nèi)毒素:內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分,叫做脂多糖。脂多糖對宿主是有毒性的。雖然內(nèi)毒素緊密地嵌入細(xì)胞壁中,但也會不斷地向周圍環(huán)境釋放內(nèi)毒素,這種釋放不僅僅是因為細(xì)胞的解體和死亡造成的,也會發(fā)生在正常細(xì)胞生長和分裂過程中。
內(nèi)毒素不是蛋白質(zhì),因此非常耐熱。在100℃的高溫下加熱1小時也不會被破壞,只有在160℃的溫度下加熱2到4個小時,或用強堿、強酸或強氧化劑加溫煮沸30分鐘才能破壞它的生物活性。與外毒素不同之處在于:內(nèi)毒素不能被稀甲醛溶液脫去毒性成為類毒素;把內(nèi)毒素注射到機體內(nèi)雖可產(chǎn)生一定量的特異免疫產(chǎn)物(稱為抗體),但這種抗體抵消內(nèi)毒素毒性的作用微弱。
內(nèi)毒素對細(xì)胞培養(yǎng)的影響
細(xì)胞形態(tài)
內(nèi)毒素可以改變細(xì)胞的外形,例如肝細(xì)胞外形改變并引發(fā)其吸收六碳糖的能力降低。在含有內(nèi)毒素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞時,細(xì)胞形態(tài)會發(fā)生明顯變化,如細(xì)胞體積縮小、細(xì)胞折光性降低。
激活免疫反應(yīng)
內(nèi)毒素可以與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,引起免疫反應(yīng),激活組織內(nèi)的炎性細(xì)胞和炎癥因子的釋放。它還可能觸發(fā)細(xì)胞的炎癥反應(yīng),影響細(xì)胞的生長、健康和實驗結(jié)果。
影響細(xì)胞功能
內(nèi)毒素對細(xì)胞的功能有顯著影響,包括改變細(xì)胞的能量代謝和蛋白質(zhì)合成。此外,內(nèi)毒素還可以干擾胰島素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,從而影響細(xì)胞的能量代謝和蛋白質(zhì)合成。
影響細(xì)胞生長
內(nèi)毒素對細(xì)胞的生長和功能有負(fù)面影響,尤其是在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,可能導(dǎo)致實驗中的錯誤結(jié)論。不同內(nèi)毒素和不同細(xì)胞系之間的毒性程度各不相同。
影響基因表達(dá)
內(nèi)毒素可以刺激白細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生組織因子、激活鼠巨噬細(xì)胞,以及通過極低水平的內(nèi)毒素抑制鼠類紅細(xì)胞集落形成等一系列指標(biāo)。
影響轉(zhuǎn)染效率
內(nèi)毒素會對原代細(xì)胞和敏感培養(yǎng)細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染過程造成重要影響,高內(nèi)毒素會與DNA競爭轉(zhuǎn)染試劑,從而減少質(zhì)粒DNA的攝取量,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降。
內(nèi)毒素在不同細(xì)胞系中的毒性程度存在顯著差異。一些細(xì)胞系對內(nèi)毒素的敏感性非常高,甚至在內(nèi)毒素濃度低于1 ng/mL的情況下就會表現(xiàn)出失調(diào)現(xiàn)象。例如,癌性腸上皮細(xì)胞T84和Caco-2對內(nèi)毒素不具有反應(yīng)性,而SW620和HT29細(xì)胞在內(nèi)毒素刺激下能分泌IL-8等細(xì)胞因子。此外,一些歷史悠久的細(xì)胞系如HeLa和CHO細(xì)胞,隨著時間的推移可能被自然選擇為耐內(nèi)毒素。
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